不用看实验书啦！这里有最细致的检测细胞凋亡Tunel法~~-医学方

细胞凋亡中，基因组DNA双链断裂或单链断裂而暴露大量的粘性3'-OH末端，可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的催化下加上荧光素(FITC)标记的dUTP斗仙官网，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测细胞凋亡情况孔莹资料 。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。Tunel法可以对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色傲世风华，能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征，可检测出极少量的凋亡细胞，因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用川东游击队 。
前面我们介绍了Tunel检测样本的制备以及样品进行透膜处理，今天继续为大家介绍Tunel的标记与检测绿茵伯乐。

首先在进行Tunel检测过程中，我们需要设置四组：
（1）阳性对照：DNA酶I（DNase I）处理制备阳性对照载玻片。DNase I可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶，人为造成细胞凋亡末世之洛泺。
（2）阴性对照：使用不含TdT酶的对照孵育缓冲液，用ddH2O替代TdT酶。
（3）实验处理组。
（4）实验对照组熊音 。
标记与检测步骤：
1.阳性对照制备：按1:10的比例用去离子水稀释10×DNase I Buffer，取其中100 μl滴加到已通透的样本上，室温孵育5min。向剩余100μl 1×DNase I Buffer中加1μl DNase I (1U/μl)。洗掉液体，泽北荣治加入100μl含DNase I的缓冲液，室温孵育10min。洗掉液体，并将载玻片放入超纯水中洗涤3次失贞姬妾 。
2．按1:5的比例用去离子水稀释5×Equilibration Buffer初三数学二次函数星方天使。将四组样本滴加100μl 1×Equilibration Buffer覆盖样本区域（可用组化笔将样品圈好），室温孵育10-30分钟。

3.配制Tunel检测液：Tunel检测液按照下列表格配置，检测液需充分混匀。同时配制好的Tunel检测液必须一次使用完毕，不能冻存。阴性对照组配置过程中不加TdT酶的对照孵育缓冲液，用ddH2O替代TdT酶。
组分：总体积（50μl体系）
（1）ddH2O：34μl
（2）5× Equilibration Buffer：10μl
（3）FITC-12-dUTP Labling Mix：5μl
（4）Recombinant TdT Enzyme：1μl
4.将载玻片上的100μl 1×Equilibration Buffer洗掉帝妃策 ，再加入50μl TdT孵育缓冲液.
5.将载玻片置于湿盒内，在37℃避光孵育60min。后续步骤注意避光操作。
6.将载玻片置于PBS溶液中室温孵育5min,重复一次。
7..轻轻擦掉样本周围及背面的PBS溶液。为了降低背景王志千，载玻片在用PBS洗一遍后残唐再起 ，可再用含0.1% Triton X-100和5mg/ml BSA的PBS洗3次封神进化，每次5min买麦网，这样可将游离的未反应标记物清除干净旧人折火一夏。
8.染核：向玻片上滴加DAPI，或者Hoechst复染细胞核，一般为蓝色荧光。避光孵育5-10min。
9.使用PBS轻洗玻片3次，每次5min门佳慧，洗去多余的DAPI刘韦伯。
10.用吸水纸吸干玻片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察并采集图像，注意选择对应的激发光源。DAPI/Hoechst能将细胞核染上蓝色荧光，只在凋亡的细胞核中才有FITC-12-dUTP掺入而定位的绿色（或者红色）荧光。

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